四軍醫大構建HBV全基因克隆質粒細胞系

    第四軍醫大學流行病學教研室主任閆永平教授等應用分子生物學克隆技術，在國內首次成功構建體外HBV全基因克隆質粒pcDNA3-3HBV細胞系。據介紹，由于乙肝病毒（HBV）宿主范圍窄，動物模型缺乏，迄今用于繁殖HBV的所有組織培養系統，都是用串聯的HBV基因組，因而制約了對HBV的深入研究。將HBVDNA轉移至靶細胞，建立表達HBV的體外培養細胞模型，是當前研究HBV生物學特性及其發病機制的一種新思路。對此，閆永平等研究人員采用克隆技術，將以3倍HBV基因的重組真核表達質粒，通過體外培養分離、細胞轉染、抗原表達及檢測鑒定等一系列技術處理后，從而成功地克隆出一種全新的HBV全基因組克隆轉染細胞系“pcDNA3-3HBV”。

    該細胞系檢測結果顯示，4周“pcDNA3-3HBV”即穩定轉染人肝母細胞瘤細胞系（HepG2）靶細胞，陽性克隆形成；培養上清HBsAg及HBeAg呈陽性，細胞內HBcAg呈核漿型分布；擴增可見HBVS基因mR鄄NA表達；上清中HBV特異性前S/S基因陽性，HBV滴度48小時為1×108拷貝/升。提示構建的HBV全基因細胞系在轉錄、復制及特異性表達方面良好，能產生較高水平的HBV。

    研究人員認為，HBV基因組呈雙鏈閉合環狀，基因結構緊湊，其開放讀框分布于全長DNA。用其構建的“pcDNA3-3HBV”含有完整的頭尾串聯的HBV全基因，載體pcD-NA3帶有CMV早期啟動增強子，轉染細胞可分泌結構完整的病毒顆粒。同時，其優點還在于病毒復制可持續時間長，且能傳代培養。目前在該領域水平上，國外僅利用轉染細胞的培養上清感染細胞研究HBV的感染機制，而我國已利用陽性血清成功感染Hep×G2細胞和原代培養的滋養層細胞，并將其分泌的HBV建成接近自然狀態。這個HBV全基因克隆細胞系，為我國HBV感染機制及胎盤滋養層細胞特異性受體的后續研究奠定了堅實基礎并帶來廣闊的應用前景。