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錘頭狀核酶降低小鼠胰島細胞經CD95途徑的凋亡

【?2005-12-30 發布?】　臨床報道  

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    （武漢）為了研究錘頭狀核酶通過調控CD95的表達，對小鼠胰島細胞凋亡的影響,探索提高胰島移植物存活率的新途徑，研究者體外構建針對CD95 mRNA 93位點的錘頭狀核酶(pU6-Rz93)和突變型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型膠原酶消化法分離小鼠胰島細胞，通過干擾素-γ(IFN-γ)和白細胞介素1α(IL-1α)誘導其高表達CD95后，經鈉米載體-Effectene將核酶轉染至該細胞。通過逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫印跡檢測(Western blot)法檢測胰島細胞CD95的表達。胰島細胞經抗CD95的抗體(JO2)作用后，以Caspase-3活性檢測試劑盒檢測轉染前后細胞Caspase-3活性的變化；MTT法測細胞的增殖；Annexin-Ⅴ凋亡檢測試劑盒檢測細胞凋亡，并觀察了各組細胞對細胞毒T淋巴細胞(CTL)殺傷的反應能力。結果細胞因子可誘導小鼠胰島細胞高表達CD95分子。轉染pU6-Rz93組的胰島細胞CD95的表達與轉染空載體組和轉染pU6-dRz93組相比，明顯下降。經JO2處理后，轉染pU6-Rz93組胰島細胞的Caspase-3活性和凋亡率明顯降低，細胞增殖活性和抵抗CTL殺傷的能力顯著增強?？梢娽槍as mRNA 93位點的錘頭狀核酶能顯著抑制小鼠胰島細胞CD95的表達，使其免于CD95途徑的凋亡,為提高胰島移植物的存活率提供了實驗基礎。 /**/
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